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      alpco試劑問題與解答

      發布時間: 2023-02-15  點擊次數: 712次

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      alpco問題與解答

      所有孔變為亮藍色用于比色測定

      鋼板清洗不足

      對于自動清洗機:檢查噴嘴是否堵塞,驗證分配量,并定期清潔以防止和清除任何堆積物。有關更多維護信息,請參閱用戶手冊。

      對于手動沖洗:確保所有井都用沖洗緩沖液強制過滿。避免使用多通道移液管進行清洗??紤]從清洗瓶切換到手持式歧管或自動洗板機,特別是在進行化學發光分析時。這里提供了顯示正確洗滌技術的視頻。

      不要跳過清洗或浸泡步驟。如果不在SA-HRP和底物步驟之間清洗,將導致所有井顯示非常高的信號。

      酶綴合物污染底物

      確保所有容器清潔且標記清晰。檢查TMB是否為藍色。如果TMB變為藍色,請不要在化驗中使用,并聯系產品支持人員。使用前不要將基材暴露在陽光下。使用新的試劑容器添加每個組分。

      高背景(空白或0標準值過高)

      鋼板清洗不足

      對于自動清洗機:檢查噴嘴是否堵塞,驗證分配量,并定期清潔以防止和清除任何堆積物。有關更多維護信息,請參閱用戶手冊。

      對于手動沖洗:確保所有井都用沖洗緩沖液強制過滿。避免使用多通道移液管進行清洗??紤]從清洗瓶切換到手持式歧管或自動洗板機,特別是在進行化學發光分析時。這里提供了顯示正確洗滌技術的視頻。

      不要跳過清洗或浸泡步驟。

      舊的或受污染的洗滌緩沖液

      清洗緩沖液存放時間過長或留在自動清洗管中會導致污染。根據需要準備新鮮的洗滌緩沖液,并定期清潔自動洗滌設備。

      酶綴合物污染底物

      確保所有容器清潔且標記清晰。檢查TMB是否為藍色。如果TMB變為藍色,請不要在化驗中使用,并聯系產品支持人員。使用前不要將基材暴露在陽光下。使用新的試劑容器添加每個組分。

      錯誤的共軛稀釋

      高于正常濃度可能導致背景升高。檢查殘余體積并確認綴合物制備正確。

      讀板器中使用了錯誤的過濾器

      確認在讀取銘牌時使用了協議中指示的正確過濾器。包括使用說明中所示的建議減去空白或OD讀數。

      標準品和樣品無顯色或OD讀數非常低

      讀板器中使用了錯誤的過濾器

      確認在讀取銘牌時使用了協議中指示的正確過濾器。

      試劑配制錯誤

      確保所有容器都有清晰的標記,并將適當的濃縮液和稀釋劑添加到正確的小瓶中,以使每個“工作"成分用于分析。

      試劑混合不充分

      使用前,讓重組試劑放置在手冊中所示的時間長度內。使用適當的設備(渦流混合器等)確保試劑在使用前是均勻的。

      板材晃動不足

      不正確的搖動運動會導致混合不足和抗體/分析物相互作用。按照使用說明中建議的速度搖動板。建議使用半徑很小的軌道運動振動器。參見示例。

      試劑中的混合

      如果一次運行多個分析,請將試劑分開以避免混淆。在向分析板添加試劑之前,仔細檢查試劑標簽。

      試劑被污染或添加順序錯誤

      驗證所有化驗成分的外觀、儲存條件和有效期。按照協議中的步驟進行操作。確保按正確順序添加每個組件。

      使用了備用部件批次或過期部件

      某些組件具有高度的批次特異性。務必與制造商核實是否使用了備用部件批次。不要使用過期的試劑。

      未正確遵循分析培養時間

      遵循方案中所示的培養時間和溫度。降低任一因素都會影響測定動力學,并可能導致低信號。如果方案列出了TMB培養的時間范圍,則確保在建議的最長時間內培養試驗。

      延遲讀取板材

      如果進行化學發光ELISA,則應在短時間內讀取平板。有關套件特定時間,請參閱協議。延遲讀取印版會導致信號降低。

      僅樣品無顯色或OD讀數非常低

      實驗設計中的錯誤

      調查樣品來源。如果可能,使用替代方法測試樣品,以確認樣品在工作測定范圍內對感興趣的生物標志物應為陽性。當刺激生物標志物生產時,可能需要調整實驗設計。

      樣品處理不正確

      確保樣品未在室溫或冷藏條件下長時間暴露。驗證樣品未經歷重復的凍融循環。如果可能,在≤-70°C的溫度下等分并儲存樣品。

      樣本稀釋計算錯誤

      驗證樣品稀釋度是否正確。如有必要且在試劑盒規格范圍內,以較高濃度(較低稀釋度)重新測試樣品。

      未驗證的樣本類型

      未經驗證的樣品類型可能與試劑盒的測定緩沖液或測定范圍不兼容。

      板材晃動不足

      不正確的搖動運動會導致混合不足和抗體/分析物相互作用。按照使用說明中建議的速度搖動板。建議使用半徑很小的軌道運動振動器。參見示例。

      控制超出范圍

      試劑處理不正確

      確保試劑已正確儲存和處理,且在有效期內。注意,一些試劑在重構后的保質期有限。

      標準曲線差

      驗證是否使用了適當的標準曲線,并對照先前分析的值和分析證書中給出的值檢查結果。有關更多信息,請參閱“較差標準曲線"部分。注:對于化學發光測定,不同的化學發光讀數器的RLU可能會有很大差異。

      標準品和/或對照品重構錯誤

      有關標準品/校準品和對照品重構的正確體積和緩沖液,請參見方案和批次特定分析證書。使用前,讓重組試劑放置在手冊中所示的時間長度內。使用適當的設備(渦流混合器等)確保試劑在使用前是均勻的。

      使用了錯誤的曲線擬合

      使用方案中建議的曲線擬合。如果提供了多個建議,請使用適合標準數據點的回歸方法。強烈建議使用帶有4參數和5參數回歸選項的軟件程序。

      樣本的意外結果

      樣品制備不當

      按照方案中的方法進行適當的樣品制備。確保樣品未在室溫或冷藏條件下長時間暴露。驗證樣品未經歷重復的凍融循環。如果可能,在≤-70°C的溫度下等分并儲存樣品。

      樣本ID混淆

      檢查樣本ID,以確認其已正確標記并添加到平板上。

      樣品稀釋誤差

      如有必要,驗證樣品稀釋度是否正確,外推的樣品值是否與正確的稀釋系數相乘。

      報告單位的差異

      驗證報告的計量單位與分析的計量單位一致。執行任何必要的換算計算。當比較不同試劑盒中獲得的值時,如果有參考標準,確保校正化驗校準中的任何差異。

      實驗設計中的錯誤

      調查樣品來源。如果可能,使用替代方法測試樣本,以確認預期樣本值。當刺激生物標志物生產時,可能需要調整實驗設計。

      干擾物質

      考慮與樣本基質(如使用抗凝劑)、臨床診斷(如類風濕因子)或治療相關的潛在干擾物質。

      特異性

      由于糖基化、蛋白質折疊和抗體特異性的差異,不同系統(大腸桿菌、酵母、哺乳動物細胞系)中表達的天然蛋白質和重組蛋白質的識別可能有所不同。不同供應商的套件可能會有不同的認可度。

      含量漂移:從板開始到結束的值差異

      因重組或稀釋導致的延遲

      在開始化驗工作流程之前,準備好標準品、對照品和稀釋樣品。

      試劑不在溫度下

      在開始化驗前,確保所有所需試劑處于使用說明書中規定的室溫。

      向第一口井和最后一口井添加試劑之間的延長時間

      如果可能,在稀釋板或微量滴定管中制備標準品和對照品,然后使用多通道移液管轉移至測定板。使用試劑容器和多通道移液管將常用試劑添加到測定板中。

      批間變異性(對照品或在不同平板上測試的樣品的精度差)

      操作員間可變性

      觀察試劑制備、移液技術和測定時間的差異。

      移液管校準的差異

      移液管校準的差異可能會導致可變性,特別是在移液量較小時。

      儀器儀表的差異

      當在同一天或不同的日子在多個平板上測試樣品或對照品時,應在相同的設置下使用相同的平板振動器、平板清洗器和平板讀取器。

      環境條件的變化

      注意溫度的差異。請記住,一般室溫、靠近窗戶(尤其是在非常寒冷或非常晴朗的日子)以及靠近可能會散發熱量的儀器可能會影響化驗溫度。

      樣品處理的差異

      額外的凍融循環或在室溫或冰箱中增加的時間可能會影響樣品結果。

       

       

       

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